Was ist das Substrat für Beta-Galactosidase?
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Video: Beta-galactosidase ONPG activity assay 2024, Juli
Anonim

β-Galactoside umfassen Kohlenhydrate mit Galaktose wo die glykosidische Bindung über der liegt Galaktose Molekül. Substrate verschiedener β-Galactosidasen umfassen Gangliosid GM1, Lactosylceramide, Lactose und verschiedene Glykoproteine.

Warum wird Onpg davon als Substrat für B-Galactosidase verwendet?

ortho-Nitrophenyl- β - Galaktosid ( ONPG ) ist kolorimetrisch und spektrophotometrisch Substrat zur Erkennung von β - Galaktosidase Aktivität. β - Galaktosidase wird für die Laktoseverwertung benötigt, damit die Intensität der erzeugten Farbe Gebraucht als Maß für die Enzymrate.

Wie baut Beta-Galactosidase Laktose ab? β - Galaktosidase hat drei enzymatische Aktivitäten (Abb. 1). Erstens kann es das Disaccharid spalten Laktose Glukose und Galaktose zu bilden, die dann in die Glykolyse eintreten können. Zweitens kann das Enzym die Transgalactosylierung von. katalysieren Laktose zu Allolactose, und drittens kann die Allolactose in die Monosaccharide gespalten werden.

Wenn man dies berücksichtigt, was ist ein Beta-Galactosidase-Assay?

Hintergrund. β - Galaktosidase wird durch das lacZ-Gen des lac-Operons in E. coli kodiert. Es ist ein großes Protein (120 kDa, 1024 Aminosäuren), das ein Tetramer bildet. Aus diesem Grund ist ONPG/ β -Gal Assays werden als "Miller" bezeichnet Assays , und eine standardisierte Menge von β -Gal-Aktivität ist eine "Miller-Einheit".

Wo kommt Beta-Galactosidase vor?

Das GLB1-Gen liefert Anweisungen zur Herstellung eines Enzyms namens Beta - Galaktosidase (β- Galaktosidase ). Dieses Enzym ist gelegen in Lysosomen, das sind Kompartimente innerhalb von Zellen, die verschiedene Arten von Molekülen abbauen und recyceln.

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